wb蛋白为什么会降解

略懂点知识 · 2025-01-02 06:00:39

WB(Western Blot)蛋白降解的原因可以分为实验技术层面和生物学层面:

实验技术层面的原因

样品制备与处理

取材到液氮速冻耗时过长或制样时没有保持低温环境,可能导致蛋白降解。

没有加蛋白酶抑制剂,也可能导致蛋白降解。

蛋白发生可逆性沉淀,如低温保存时蛋白浓度高导致沉淀,或pH值过低导致蛋白沉淀,也会影响WB结果的准确性。

样本处理

蛋白样品在经过100℃沸水煮样后,虽然蛋白质处于完全变性失活的状态,但完全变性后的样品仅仅是抑制了样品降解的速度,随着保存时间的延长,样品的降解会逐渐显现出来。

生物学层面的原因

翻译后调控或修饰

蛋白的mRNA水平可能保持不变,但经过翻译过程后蛋白的产量显著增加,这可能导致蛋白的多种修饰形式如糖基化、磷酸化、乙酰化等,从而影响蛋白的稳定性和检测。

建议

样品制备:在实验过程中,应确保样品制备和处理的每一步都严格按照操作规程进行,包括快速冷冻、低温保存以及添加蛋白酶抑制剂等。

样本保存:应尽量减少样本的保存时间和冻融次数,避免因保存条件不当导致蛋白降解。

实验条件:在实验过程中,应保持低温环境,避免高温处理导致蛋白变性失活。

通过以上措施,可以有效减少WB实验中蛋白降解的可能性,提高实验结果的准确性和可靠性。

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