WB实验，全称为 蛋白质印迹或免疫印迹（Western Blot, WB），是一种基于抗原抗体特异性结合原理的综合性免疫学检测技术。该技术主要用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平，并广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测等多个方面。
实验步骤
制样：
包括裂解细胞或组织，提取总蛋白，并使用裂解缓冲液（如RIPA）进行处理，同时加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解。
SDS-PAGE电泳：
根据目标蛋白的分子量选择合适的分离胶和浓缩胶浓度，将变性后的蛋白样品上样到凝胶上，在适当的电压下进行电泳，使蛋白根据分子量大小在凝胶中分离。
转膜：
选择合适的转膜膜（如NC膜或PVDF膜），采用湿转或半干转等方法将凝胶上的蛋白转移到膜上，注意保持膜的湿润和避免气泡产生。
抗体结合与检测：
将转膜后的膜与第一抗体特异性结合，再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最后通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
内参对照：
为了确保实验的准确性和可靠性，通常会选择一个内参蛋白（如管家基因编码的蛋白），其表达水平在多种组织和细胞中相对恒定，用于排除上样量差异和评估实验体系的正常性。
实验意义
WB实验在蛋白表达分析中具有重要作用，能够鉴定能够被特异性抗体识别的大分子抗原（通常是蛋白质），并测定其分子量。在传染性疾病诊断中，如HIV的病原学确诊，WB实验被作为优选的检测方法，其结果常被视为判断其他检测方法准确性的“金标准”。
注意事项
样本制备的质量直接影响实验结果的准确性和可重复性。
选择合适的内参对于实验的准确性和可靠性至关重要。
实验过程中需注意操作规范，避免污染和交叉反应。
通过以上步骤和注意事项，可以有效地进行WB实验，从而获得可靠的实验结果。