酵母双杂交(Yeast Two-Hybrid)是一种 检测蛋白质-蛋白质相互作用的技术。该技术的基本原理是利用酵母细胞内的两种互补DNA序列相遇,使两个融合的蛋白质互相作用。通过这种相互作用,可以激发酵母细胞内特定的报告基因的表达,从而判断两个蛋白质之间是否存在相互作用关系。
酵母双杂交系统包括以下几个关键组成部分:
转录激活因子:
通常使用酵母转录因子GAL4,它包含两个独立的功能结构域,即DNA结合结构域(DNA-BD)和转录激活结构域(AD)。
待研究的蛋白质:
将待研究的两种蛋白质分别克隆(融合)到转录激活因子的DNA结合结构域和转录激活域上,构建成融合表达载体。
报告基因:
当两个蛋白质的结合能够激活报告基因的表达时,表明这两个蛋白质之间存在相互作用关系。
酵母双杂交技术的应用非常广泛,不仅可以用于研究蛋白质之间的相互作用,还可以用于研究蛋白质的功能、定位以及蛋白质与DNA、RNA之间的相互作用。这种技术具有高度灵敏性和可靠性,是分子生物学领域的重要实验手段。