基因过表达是一种分子生物学技术,其核心思想是将一个特定的目标基因通过人工手段使其在细胞或生物体中的表达量超过正常水平。具体来说,基因过表达涉及以下步骤和原理:
克隆目标基因:
将想要过量表达的基因的编码序列(CDS)克隆到合适的表达载体中,如质粒或病毒载体。
构建载体:
在目的基因的上游添加强启动子,以确保基因能够在宿主细胞中高效转录。
导入宿主细胞:
将构建好的载体通过适当的方法导入到宿主细胞中,如植物细胞或动物细胞。
表达分析:
通过表型观察、蛋白印迹等技术分析目标基因的表达情况,研究其功能。
基因过表达技术常用于研究基因功能,特别是在基因敲除后可能导致致死或功能冗余的情况下。此外,它也可以用于生产重组蛋白,特别是在原核生物如细菌中进行大规模生产