上样缓冲液是在 电泳分离过程中进行加样的缓冲溶液。它的主要作用有以下几点:
使样品上色:
上样缓冲液能够使欲分离的样品上色,从而在电泳时形成肉眼可见的指示带,方便辨别电泳的速度和位置。
增加样品密度:
上样缓冲液可以增加样品的密度,确保样品均匀进入样品孔内,使加样过程方便迅速。
提供电荷平衡:
对于蛋白质电泳,上样缓冲液中的成分如SDS(十二烷基硫酸钠)可以确保样品中的所有蛋白带电荷一致,减少电荷对电泳结果的影响。
保护蛋白质结构:
上样缓冲液中的还原剂如DTT(二硫苏糖醇)可以保持蛋白质的二硫键处于断开状态,确保蛋白质分子结构的线性,从而减少空间布局对电泳结果的影响。
作为电泳指示剂:
上样缓冲液中的溴酚蓝等染料可以作为电泳指示剂,用来观察电泳进度。
防止样品漂浮:
上样缓冲液中的甘油可以防止样品在电泳过程中漂浮出点样孔。
常见的上样缓冲液成分包括Tris-HCl、Tris甘氨酸、EDTA、SDS、DTT、溴酚蓝和甘油等。不同的样品(如蛋白质、DNA和RNA)可能需要不同的上样缓冲液配方,以满足其特定的实验需求。
建议
选择合适的上样缓冲液:根据实验需求选择合适的上样缓冲液,确保样品在电泳过程中能够正确分离和显示。
注意成分浓度:不同成分的浓度会影响电泳结果,需按照实验要求调整上样缓冲液的配方和浓度。
保持缓冲液稳定性:上样缓冲液应储存在适当的条件下,确保其稳定性和有效性。