根据《建设工程监理规范》的规定， 总监理工程师、总监代表、专业监理工程师这三个职位都必须是监理工程师。其中，总监理工程师是由监理单位法定代表人书面授权的；总监代表是经监理单位法定代表人同意，由总监理工程师书面授权的；专业监理工程师是根据项目监理岗位职责分工和总监理工程师指令，负责工作的。
此外，虽然其他职位如监理员、监理企业负责人等也需要具备一定的监理知识和技能，但它们并不要求必须是监理工程师。
因此，在工程项目中，总监理工程师、总监代表和专业监理工程师这三个职位必须由持有监理工程师资格证书的专业人员担任。